Enter your email Address

  • Please Create a Menu
Телефонуйте нам +38 (061) 707-79-75
Центр планування
×
  • Головна
  • Наш центр
    • Наш персонал
    • Видео
      • Ультразвук
      • Гінетик ендокрінолог
      • Дитячий гінеколог
      • Ембріологія
      • Цитогенетик
      • Гінеколог
      • Андрологи
      • Психотерапевт
      • Психолог
  • Відділення
    • Медико-генетична консультація та планування сім’ї
    • Відділення репродуктивного здоров’я
    • Відділення допоміжних репродуктивних технологій
    • Відділення анестезіології та інтенсивної терапії
    • Клініко-діагностична лабораторія
  • Статті
    • Архів
    • Науменко Татьяна Геннадьевна
    • ВАЛЮСОН 8
    • Психологическое бесплодие
    • Цитогенетика
    • На прийомі у дитячого гінеколога
    • Відділ ПЛР клініко-діагностичної лабораторії КУ «ОМЦРЛ»ЗОР.
    • Метод полімеразної ланцюгової реакції
    • УЗД в дитячій та підлітковій гінекології
    • Все про анестезію
    • Влияние стресса на репродуктивную функцию
    • Менструальний цикл: коли необхідна допомога?
    • Психологическая незрелость – одна из причин бесплодия у женщин .
    • Психогенное бесплодие
    • Закладки
    • Ожиріння – «смачна» хвороба
    • Толерантность и дискриминация по отношению к ВИЧ – инфицированным.
    • Тривожне очікування сексуальної поразки можна подолати
    • Фенілкетонурія
  • Публічна інформація
    • Біографічна довідка керівника
    • Фінансова звітність 2020
    • Фінансова звітність 2021
    • Благодійні внески
    • Стан забезпечення лікарськими засобами
    • Річні плани закупівель
    • Структура, принципи формування і розмір винагороди
    • Рішення суб’екта управління об’ектами комунальної власності
    • Річні звіти керівника
    • Аудиторські вистновки
    • Цілі діяльності комунального підприємства
    • Статут
    • Договори, учасником яких є підприємство
    • Фактори ризику
  • Контакти
  • Вхід
    • Інфо
      • Плазмоліфтинг
      • Доповнення до прейскуранту
      • Вакцинація
        • Вакцинація міфи та вірус маячні
      • Все про вакцинацію від COVID-19
      • Наказ та прейскурант
      • Гарантії медичного обслуговування населення
      • Підсумок заходів ,направлених на зберення репродуктивного здоров’я населення області
      • Климакс
      • До уваги пацієнтів
      • Менструальний цикл
      • УЗД в дитячій та підлітковій гінекології
      • Надлишкова вага тіла та ожиріння
      • Показання для плазмафереза
      • ДИТЯЧА ГІНЕКОЛОГІЯ
      • Безпліддя
    • Вихід

Метод полімеразної ланцюгової реакції

25.03.2019adminБез категорії

Метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) заснований на багаторазовому копіюванні певної ділянки ДНК за допомогою ферменту – термостабільної ДНК-полімерази і специфічних праймерів в процесі повторюваних температурних циклів. Відбувається багаторазове збільшення кількості специфічних фрагментів ДНК збудника. Метод ПЛР має високу аналітичну чутливість та специфічність. Також перевагою є швидкість виконання досліджень.

Основні етапи ПЛР:

І. Виділення ДНК

Клінічний зразок обробляється лізуючого розчином в присутності частинок силики-сорбенту. В результаті відбувається вивільнення ДНК, яка зв’язується з частинками сорбенту. Інші компоненти лизированого клінічного матеріалу залишаються в розчині і видаляються при осадженні сорбенту центрифугуванням і подальшої відмиванням. При додаванні розчину для еллюціі ДНК до сорбенту відбувається перехід ДНК з поверхні силики в розчин, який відокремлюється від частинок сорбенту центрифугуванням. В результаті цієї процедури утворюється високоочищений преперат ДНК, вільний від інгібіторів реакції ампліфікації, що забезпечує високу аналітичну чутливість ПЛР дослідження.

Фото 1.  Виділення ДНК з клінічного матеріалу

Фото 2.  Виділення ДНК з клінічного матеріалу

ІІ. Ампліфікація ДНК

– процес багаторазового копіювання специфічної ділянки ДНК, обмеженого праймерами. Для проведення ампліфікації необхідна наявність в реакційної суміші ряду компонентів та прилад, який в короткі терміни з точністю може досягати  і підтримувати певну температуру.

Склад реакційної суміші:

  1. ДНК-матриця, що містить ту ділянку ДНК, який потрібно ампліфікувати.
  2. Праймери- короткі синтетичні олігонуклеотиди, комплементарні протилежним кінцях різних ланцюгів необхідного фрагмента ДНК.

3.Термостабільная ДНК-полімераза – фермент, що каталізує реакцію полімеризації ДНК.

  1. Дезоксирибонуклеозидтрифосфати (dATP, dGTP, dCTP, dTTP).
  2. Буферний розчин, що забезпечує необхідні умови реакції.

 

Якщо в реакційній суміші присутня шукана ДНК, то відбувається ампліфікація специфічної ділянки ДНК, яка складається з:

  1. Денатурація,
  2. Отжиг,
  3. Єлонгація.

В процесі ампліфікації відбувається багаторазове збільшення кількості специфічних фрагментів ДНК. При цьому відбувається копіювання тільки тієї ділянки, яка задовольняє заданим умовам, і тільки в тому випадку, якщо він присутній в досліджуваному зразку.

Фото 3.  Постановка реакції ампліфікаціїї в ПЛР-боксі

Фото 4.  Програмування ампліфікатора

Фото 5.  Постановка реакції у ампліфікатор

ІІІ Детекція

Детекцію проводять за допомогою спеціалізованого приладу – детектора ALA-1/4 та програмного забезпечення. Флуоріметр  дозволяє реєструвати флуоресцентний сигнал зразків безпосередньо після проведення ПЛР через стінку пробірок, що зводить до мінімуму ризик контамінації лабораторії продуктами ПЛР.

Л.В. Носарева (біолог І категорії)

18.03.2019р.

 

Hits: 3949

Додати коментар Cancel


vaccine logo

Обласний медичний центр репродукції людини

реєстратура: (061) 707-79-75, (061) 717-21-84, (097) 993-26-98

zocrrfs@meta.ua

вул. Дивногорська, 5, вул. Жаботинського (Правди) , 3-А

Останні коментарі

    Останні новини

    • Плазмоліфтинг Кві 15

      Плазмоліфтинг – інноваційний метод лікування пацієнта плазмою власною кров’ю. Процедура...

    • Доповнення до прейскуранту Кві 15

      Hits: 2

    • До уваги пацієнтів Кві 2

      До уваги пацієнтів Витяг постанови  КМУ  від 15.02.2021 р. № 133 «Деякі...

    Copyright ©2018 all rights reserved
    Веб студия Ариадна